【產(chǎn)品簡介】

酪酰胺信號放大（TSA）系統(tǒng)可用于檢測熒光免疫細胞化學(xué)（ICC）、免疫組織化學(xué)（IHC）中的低豐度靶點，可將信號靈敏度提高100倍。TSA 熒光試劑盒使用辣根過氧化物酶（HRP）直接催化固定化酶周圍的熒光基團共價沉積，形成永久性共價鍵結(jié)合。在運用HRP二抗及一抗在微波熱修復(fù)條件下脫離掉抗原失活的原理，重復(fù)此過程，即可實現(xiàn)同種屬熒光雙標及熒光三標以及多標（注：此過程僅適用于石蠟切片的熒光多標）。

此試劑盒中的熒光探針可單獨或配合使用。超敏型Flare熒光染料的亮度比普通型Flare熒光染料高10倍以上，不再需要增強劑輔助，即可獲得高亮度的熒光標記。

【儲存與運輸】

冰袋 (wet ice) 運輸；-20℃長期保存,短期于4℃保存，有效期 12 個月。

【使用方法】

細胞爬片

1.固定通透

在培養(yǎng)板中將已爬好細胞的玻片用PBS浸洗3次，每次3min，用4%多聚甲醛固定15min，PBS浸洗3次，每次3min。細胞通透劑（貨號：HKI0048）室溫通透20min（細胞膜上表達的抗原可省略）。

2.封閉處理

PBS浸洗3次，每次3min，吸水紙吸干PBS，滴入封閉液（貨號：HKI0009R/B/S）完全覆蓋細胞，室溫封閉30min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液，滴加用通用抗體稀釋液（貨號：HKW2083）按一定比例稀釋的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜（或37℃濕盒孵育2h）。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3min，吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標記二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA 信號放大試劑

根據(jù)需要標記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 放大試劑(Flare超敏濃縮型：超敏染料稀釋液=1:400)，孵育3-10min（具體根據(jù)預(yù)實驗條件確定）。如遇標記效果差的可適當調(diào)整熒光試劑稀釋比，正常孵育。

6.熒光多色實現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解，滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞，37℃放置8分鐘，棄去洗脫液，再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋細胞，37℃放置8分鐘，棄洗脫液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗，再重復(fù)步驟3-5，實現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復(fù)染細胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

（注：上述1-8步驟之間，除血清封閉后不用清洗外，各步驟之間都需用純水或PBS充分浸洗）

冰凍切片

1.復(fù)溫固定

冰凍切片室溫放置30min后，入純甲醇固定10min。（若采用甲醛固定液固定組織，需要進行抗原修復(fù)）

2.阻斷內(nèi)源性過氧化物酶和血清封閉

PBS浸洗切片3次，每次5min，用過氧化物酶阻斷劑（貨號：HKI0047）孵育25min，阻斷內(nèi)源性過氧化物酶，滴入封閉液（貨號：HKI0009R/B/S）37℃孵育20min。

3.一抗孵育

棄掉封閉液，滴加適當比例稀釋的一抗并放入濕盒，4℃孵育過夜。

4.二抗孵育

PBST浸洗3次，每次3min，吸干多余液體滴加稀釋好的與一抗相應(yīng)種屬的HRP標記二抗，濕盒中37℃孵育1h，PBST浸洗3次，每次3min。

5.加TSA 信號放大試劑

根據(jù)需要標記的熒光顏色加對應(yīng)的TSA 放大試劑(Flare超敏濃縮型：超敏染料稀釋液=1:400)，孵育3-10min（具體根據(jù)預(yù)實驗條件確定）。如遇標記效果差的可適當調(diào)整熒光試

劑稀釋比，正常孵育。   

6.熒光多色實現(xiàn)

抗體洗脫液37℃預(yù)熱至完全溶解，滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋組織，37℃放置8分鐘，棄去洗脫液，再次滴加足量抗體洗脫液完全覆蓋組織，37℃放置8分鐘，棄洗脫液，PBS浸洗3次，每次5min，洗脫掉一抗及相應(yīng)二抗，再重復(fù)步驟3-5，實現(xiàn)熒光多色。

7.DAPI復(fù)染細胞核

8.抗熒光淬滅封片劑封片

9.相應(yīng)熒光通道拍照或掃描

（注：上述1-8步驟之間，除血清封閉后不用清洗外，各步驟之間都需用純水或PBS充分浸洗）

【注意事項】

樣本來源為兔（或小鼠），若出現(xiàn)較高非特異性熒光著色，一抗為兔抗（或鼠抗）時，可采用POLY-HRP羊抗兔鼠通用二抗(貨號：HKI0029）或POLY-HRP羊抗鼠二抗（貨號：HKI0027）。

本產(chǎn)品僅作科研用途。

為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

POLY-HRP羊抗兔二抗屬于附贈試劑，不足200T劑量，可根據(jù)需要回購。